1 范圍
本標準規(guī)定了醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)中浮游苗測試條件、測試方法。
本標準適用于醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū),無菌室或局部空氣凈化區(qū)域（包括沽凈工作臺）的浮游弟的測試和環(huán)境的驗證。
2 規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款，凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本標準。
GB/T 16292—2010
JGJ 71-1990 潔凈室施工及驗收規(guī)范
3 術(shù)語和定義
下列術(shù)語和定義適用于本標準.
3.1
菌落 colony forming units
微生物培養(yǎng)后，由一個或幾個微生物繁殖而形成的微生物集落，簡稱CFU。通用用個數(shù)表示。
3.2
浮游曲 airborne microbe
用本標準提及的方法收集懸浮在空氣中的活微生物粒子，通過專門的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。
3.3
浮流菌濃度 airborne microbe concentration
單位體枳空氣中含浮游菌菌落數(shù)的多少，以計數(shù)濃度表示，單位是個/m，或個/L。
3.4
糾偏限度 action levels
對于受控的潔凈室（區(qū)），由使用者自行設(shè)定微生物含量等級。當檢測結(jié)果超過該等級時，應啟動監(jiān)測程序?qū)υ搮^(qū)域的微生物污染情況立即進行跟蹤。
3.5
警戒限度 alert levels
對于受控的潔凈室（區(qū)），由使用者自行設(shè)定一個微生物含量等級，從而給定了一個與正常狀態(tài)相比最早警戒的偏差值。當超過該最早警戒的偏差值時，應啟動保證工藝或環(huán)境不受影響的程序及相關(guān)措施.
4 測試方法
4.1 方法提要
本標準采用的方法是計數(shù)濃度法，即通過收集懸游在空氣中的生物性粒子于專門的培養(yǎng)基（選擇 能證實其能夠支持微生物生長的培養(yǎng)基），經(jīng)若干時間和適宜的生長條件讓其繁殖到可見的菌落計數(shù)， 以判定該潔凈室的微生物濃度。
4.2 人員的職責及培訓
潔凈室（區(qū)）的測試人員應進行本專業(yè)的培訓并獲得相應資格后才能履行對潔凈室（區(qū)）測試的職責，其中包含涉及的衛(wèi)生知識和基本微生物知識。
潔凈室（區(qū)）的測試人員應選擇與生產(chǎn)操作的空氣潔凈度級別要求相適應的穿豉方式，外面的衣服不能帶進100 000級以上的區(qū)域。
4.3 儀器、輔助設(shè)備和培養(yǎng)基
選擇合適的浮游闕采樣器，包括采用無油的抽氣泵,較低的氣流流速和較大的采樣藻最，以保證培養(yǎng)基表面的水分不被吹干。
本測試需要具備儀器、輔助設(shè)備和培養(yǎng)基如下：
a）浮游菌采樣器；
b）培養(yǎng)皿；
c) 培養(yǎng)基（見本標準附錄B）；
d）恒溫培養(yǎng)箱；
e）高壓蒸汽滅菌器；
4.4 浮游菌采樣器原理
浮游菌采樣器一般采用撞擊法機理，可分為狹縫式采樣器、離心式或針孔式果樣器,狹緩式采樣器由內(nèi)部風機將氣流吸入，通過采樣器的狹縫式平板，將采集的空氣噴射并撞擊到緩慢旋轉(zhuǎn)的平板培養(yǎng)基表面上，附著的活微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落，離心式采樣器由于內(nèi)部風機的高速旋轉(zhuǎn)，氣流從采樣 器前部吸入從后部流出，在離心力的作用下，空氣中的活微生物粒子有足夠的時間撞擊到專用的固形培 養(yǎng)條上，附著的活微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落，針孔式采樣器是氣流通過一個金屬荔吸入，蓋子上是 密集的經(jīng)過機械加工的特制小孔，通過風機將收集到的細小的空氣流直接撞擊到平板培養(yǎng)基表面上，附著的活微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落。
4.5 測試要點
4.5.1 必須按照測試儀器的檢定周期,定期對儀器作檢定.使用校驗合格，且在使用有效期內(nèi)的儀器。
4.5.2 測試儀器在未進入被測區(qū)域時，若必需,則先清潔表面，或在相應的潔凈室內(nèi)準備和存放（用保護罩或其他適當?shù)赝庹直Ｗo儀器）。
4.5.3 在100級潔凈室內(nèi)用紙時，上面應蒙上一張透明不沾塵的覆蓋物，在100級潔凈室內(nèi)不能用鉛筆和橡皮。
4.5.4 使用測試儀器時應嚴格按照儀器說明書操作。
4.5.4.1 儀器開機，預熱至穩(wěn)定后，方可按儀器說明書的規(guī)定對儀器進行校正，同時檢行采樣流量，并根據(jù)采樣量設(shè)定采樣時間。
4.5.4.2 采樣口必須用便于消毒及化學性能稔定的材料制造。
4.5.4.3 采樣管嚴禁滲漏，內(nèi)壁應光滑。
4.5.4.4 采樣管的長度應根據(jù)瀏點的高度定，盡量減少彎曲。
4.6 培養(yǎng)皿
4.6.1一般采用Φ90 mm×15 mm規(guī)格的培養(yǎng)皿.可根據(jù)所選用采樣器選擇合適的培養(yǎng)皿。
4.6.2 離心式采樣器采用專用的固形培養(yǎng)條。
4.7 培養(yǎng)基
大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）或沙氏培養(yǎng)基（SDA）或其他用戶認可并經(jīng)驗證了的培養(yǎng)基。其觀制方法見附錄B。
4.8 恒溫培賽箱
必須定期對恒溫培養(yǎng)箱進行校驗。
4.9 測試步驟
4.9.1 測送前儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴格消毒。
4.9.1.1 采樣器進入被測房間前先用消毒嚴格房間的消毒劑滅菌，用于100級潔凈室的采樣器宜預先放在被測房間內(nèi)。
4.9.1.2 用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。
4.9.1.3 采樣前，先用消毒劑清洗采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤以及耳子的內(nèi)外面，采樣結(jié)束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤。
4.9.1.4 采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對采樣管的外壁及內(nèi)壁進行消毒時，應將管中的殘留液倒掉并晾干。
4.9.1.5 采樣者應穿戴與被測潔凈區(qū)域相應的工作服，在轉(zhuǎn)盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒或帶無菌手套操作。
4.9.1.6 采樣儀器蛉消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開啟浮游菌采樣器，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā),時間不少于5 min，并檢查流母并根據(jù)采樣量調(diào)整設(shè)定采樣時間。
4.9.1.7 關(guān)閉浮游菌采樣器，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子。
4.9.1.8 置采樣口于采樣點后，開啟浮游菌采樣器進行采樣。
4.10 培養(yǎng)
4.10.1 全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4.10.2 采用大豆酪蛋白瓊脂珞養(yǎng)基（TSA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在30℃?35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于2d；采用沙氏培養(yǎng)基（SDA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在20℃?25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),時間不少于5d。
4.10.3 每批培養(yǎng)基應有對照試驗,檢驗培養(yǎng)基本身是否污雜,可每批選定3只培養(yǎng)肌作對照培養(yǎng)。
4.11 菌落計數(shù)
4.11.1 用肉眼對培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計數(shù)、標記或在菌落計數(shù)器上點計,然后用5-10倍放大鏡檢查，有否遺漏。
4.11.2 若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。
4.12 注意事項
4.12.1 使用前應仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質(zhì)、破損或污染的不能使用。
4.12.2 對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細的記錄。
4.12.3 由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察,不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的曲落,并須注意細菌菌落或培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別,必要時用顯微鏡鑒別。
5 測試規(guī)則
5.1 測試條件
在測試之前，要對潔凈室（區(qū)）相關(guān)參數(shù)進行預先測試，這類測試將會提供測試懸浮粒子的環(huán)境條件，例如:這種預先測試或可包括：
a）溫度和相對濕度的測試，潔凈室（區(qū)）的溫度和相對濕度應與其生產(chǎn)及工藝要求相適應（無特殊要求時，溫度在18℃?26℃,相對濕度在45%?65%為宜），同時應滿足測試儀器的使用范圍;
b）室內(nèi)送風員或風速的瀏試，或壓差的測試；
c）高效過濾器的泄漏測試。
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